外植體的消毒
植物組織培養(yǎng)用的外植體大部分取自田間，表面上附著大量的微生物，這是組織培養(yǎng)的一大障礙。因此在材料接種培養(yǎng)前必須要消毒處理，消毒一方面要求把材料表面上的各種微生物殺滅，同時(shí)又不能損傷或只輕微損傷組織材料而不影響其生長。因此，外植體的消毒處理是植物組織培養(yǎng)工作中的重要一環(huán)。
（1）常用的消毒劑
常用的消毒劑如下表所示。理想的消毒劑應(yīng)具有消毒效果好，易被無菌水沖洗掉或能自行分解，對材料損傷小，對人體及其他生物無害，來源廣泛，價(jià)格低廉。
常用消毒劑的使用方法及效果
①酒精
酒精是最常用的表面消毒劑，以70%~75%酒精殺菌效果最好，95%或無水酒精會(huì)使菌體表面蛋白質(zhì)快速脫水凝固，形成一層干燥膜，阻止了酒精庭院設(shè)計(jì)的繼續(xù)滲入，殺菌效果大大降低。
酒精具有較強(qiáng)的穿透力，使菌體蛋白質(zhì)變性，殺菌效果好。同時(shí)它還具有較強(qiáng)的濕潤作用，可排除材料上的空氣，利于其他消毒劑的滲入。但酒精對植物材料的殺傷作用也很大，浸泡時(shí)間過長，植物材料的生長將會(huì)受到影響，甚至被酒精殺死，使用時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制時(shí)間。但酒精不能徹底消毒，一般不單獨(dú)使用，多與其他消毒劑配合使用。
②升汞
又稱氯化汞，Hg2+可以與帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)結(jié)合，使蛋白質(zhì)變性，從而殺死菌體。升汞的消毒效果極佳，但易在植物材料上殘留，消毒后需用無菌水反復(fù)多次沖洗。升汞對環(huán)境危害大，對人畜的毒性極強(qiáng)，使用后應(yīng)做好回收工作。
③次氯酸鈉
次氯酸鈉是一種較好的消毒劑，它可以釋放出活性氯離子，從而殺死菌體。其消毒能力很強(qiáng)，不易殘留，對環(huán)境無害。但次氯酸鈉溶液堿性很強(qiáng)，對植物材料也有一定的破壞作用。
④漂白粉
漂白粉的有效成分是次氯酸鈣[Ca(ClO)2]，消毒效果很好，對環(huán)境無害。它易吸潮散失有效氯而失效，故要密封保藏。
⑤過氧化氫
也稱雙氧水，消毒效果好，易清除，又不會(huì)損傷外植體，常用于葉片的消毒。
⑥新潔爾滅
這是一種廣普表面活性消毒劑，對絕大多數(shù)植物外植體傷害很小，殺菌效果好。
（2）消毒方法
①莖尖、莖段及葉片等的消毒
消毒前先對植物組織進(jìn)行修整，去掉不需要的部分，然后用自來水沖洗。對于一些表面不光滑或長有絨毛的材料，可用洗滌劑清洗，必要時(shí)用毛刷充分刷洗，硬質(zhì)材料可用刀刮。
消毒時(shí)在超凈臺(tái)上操作，先用70%酒精浸泡10~30s，以無菌水沖洗2~3次，然后按材料的老、嫩和枝條的堅(jiān)實(shí)程度，分別采用2%次氯酸鈉浸泡10~15min或用0.1%升汞浸5~10min。消毒時(shí)要不斷攪動(dòng)，使植物材料與消毒劑充分地接觸。若材料有絨毛，最好在消毒液中加入幾滴Tween-20，最后用無菌水沖洗3~5次。
②果實(shí)及種子的消毒
先用自來水沖洗10~20min，再用酒精迅速漂洗一下。果實(shí)用2%次氯酸鈉浸10min，后用無菌水沖洗2~3次。種子則先用10%次氯酸鈉浸泡20~30min，難以消毒的可用0.1%升汞消毒5~10min。對于種皮太硬的種子，也可預(yù)先去掉種皮，再用4%次氯酸鈉浸泡8~10min。
③花藥的消毒
用于組織培養(yǎng)的花藥多未成熟，其外面有花萼、花瓣或穎片保護(hù)，處于無菌狀態(tài)。消毒時(shí)將整個(gè)花蕾或幼穗用70%酒園林工程精浸泡數(shù)秒鐘，然后用無菌水沖洗2~3次，再在漂白粉中浸泡10min，最后用無菌水沖洗2~3次。
④根及底下部器官的消毒
由于這類材料生長于土壤中，表面帶菌量大，消毒較為困難。可先用自來水沖洗，軟毛刷刷洗，用刀切去損傷及污染嚴(yán)重部位，再用酒精漂洗后，置于0.1%升汞中浸5~10min或2%次氯酸鈉中浸10~15min，最后用無菌水沖洗3次。
在操作時(shí)要根據(jù)材料的大小、幼嫩、質(zhì)地等差異做出判斷后，再選擇適宜的消毒劑種類、濃度和消毒時(shí)間，切不可生搬硬套。消毒的最佳效果應(yīng)以最大限度地殺死材料上的微生物，而又對材料的損傷最小為好。
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